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基因組DNA提取原理說明

更新時間:2022-03-24      點擊次數(shù):3346
  DNA是遺傳信息的載體,是最重要的生物信息分子,是分子生物學研究的主要對象。所以基因組DNA提取實驗是分子生物學最基本實驗之一。 今天若重介紹基因組DNA提取的原理。在接下來的時間了還會介紹動物基因組DNA的提取步驟。
 
  DNA. RNA和核苷酸都是極性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有機溶劑,它們的鈉鹽比游離酸易溶于水,RNA鈉鹽在水中溶解度可達40g/L. DNA在水中為10g/L,呈黏性膠體溶液。
 
  在酸性溶液中,DNA天然狀態(tài)的DNA是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細胞核中。要從細胞中提取DNA時,先把DNP抽提出來,再把P除去,再除去細胞中的糖,RNA及無機離子等,從中分離DNA。DNP和RNP在鹽溶液中的溶解度受 鹽濃度的影響而不同。DNP在低濃度鹽溶液中,幾乎不溶解,如在0.14 mol/L的氣化鈉溶解度低,僅為在水中溶解度的1%,隨著鹽濃度的增加溶解度也增加,至1molL氯化鈉中的溶解度很大,比純水高2倍。RNP在鹽溶液中的溶解度受鹽濃度的影響較小,在0.14mo/ 氯化鈉中溶解度較大。因此,在提取時,常用此法分離這兩種核蛋白。
 
  苯酚氨仿作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用。用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。離心分層后取出水層,多次重復操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性質(zhì),用乙醇沉淀DNA。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài),真核細胞DNA的分離通常是在EDTA及SDS-類去污劑存在下,用蛋白酶K消化細胞獲得。
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